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Spherisorb色譜柱的使用注意事項(xiàng)

更新時(shí)間:2024-09-04      點(diǎn)擊次數(shù):463

Spherisorb色譜柱的使用注意事項(xiàng)

 

為確保Spherisorb色譜柱始終保持理想性能,請(qǐng)遵循以下原則:

 

A.保護(hù)柱

  在進(jìn)樣器和分析柱之間使用填料化學(xué)性質(zhì)和顆粒大小都適合的沃特世Spherisorb保護(hù)柱。使用匹配的保護(hù)柱,是保護(hù)分析柱而不影響或改變分析分離度的重要措施。保護(hù)柱需要根據(jù)樣品污染情況定期更換。當(dāng)系統(tǒng)背壓穩(wěn)步上升至設(shè)定壓力限值時(shí),通常表明需要更換保護(hù)柱。突然出現(xiàn)分叉峰或色譜性能發(fā)生其他變化也表明需要更換保護(hù)柱。

 

B. 樣品制備

1. 樣品中的雜質(zhì)往往會(huì)污染色譜柱。避免污染的一種方法是在分析之前使用填充適用填料的Oasis固相萃取小柱/色譜柱或Sep-Pak小柱凈化樣品。

2. 制備樣品時(shí),優(yōu)先選用運(yùn)行分析時(shí)要用的流動(dòng)相,或選用與之相比更弱的流動(dòng)相(就反相色譜而言,即有機(jī)改性劑含量更少;就正相色譜或親水作用色譜而言,即極性改性劑含量更少;就離子交換色譜而言,即鹽含量更少),以便獲得理想峰形和靈敏度。

3. 如果樣品不溶于流動(dòng)相,請(qǐng)確保樣品、溶劑和流動(dòng)相可以混溶,以避免樣品和/或緩沖液產(chǎn)生沉淀。用0.2 μm濾膜過(guò)濾樣品,去除顆粒物質(zhì)。如果用于溶解樣品的溶劑含有機(jī)溶劑(如乙腈、甲醇等),請(qǐng)確保濾膜材料不溶于該溶劑。請(qǐng)聯(lián)系濾膜生產(chǎn)商了解濾膜的溶劑兼容性?;蛘撸梢钥紤]在8,000 rpm下離心樣品溶液20 min,然后將上清液轉(zhuǎn)移至適當(dāng)?shù)臉悠菲恐小?/span>

 

C. pH范圍

  Spherisorb色譜柱的推薦pH范圍為2-8。表3列出了常用的緩沖液和添加劑。

此外,柱壽命將根據(jù)操作溫度以及使用的緩沖液類(lèi)型和濃度而有所不同。例如,在高溫下使用pH值為8的磷酸鹽緩沖液會(huì)縮短色譜柱壽命。

 

D. 溶劑

  為了保持理想的色譜柱性能,請(qǐng)使用高品質(zhì)色譜級(jí)溶劑。所有水相緩沖液使用前都必須過(guò)濾。推薦使用Pall Gelman Laboratory Acrodisc®過(guò)濾器。含有懸浮顆粒物的溶劑通常會(huì)堵塞色譜柱入口篩板的外表面,這會(huì)導(dǎo)致操作壓力增大,性能變差。使用前,請(qǐng)將所有溶劑徹底脫氣,避免泵和檢測(cè)器中形成氣泡。沃特世還建議使用在線(xiàn)脫氣裝置。運(yùn)行低壓梯度時(shí),溶劑脫氣尤其重要,因?yàn)樵谔荻冗\(yùn)行過(guò)程中混合水相溶劑與有機(jī)溶劑時(shí)可能形成氣泡。

 

E. 壓力

  Spherisorb色譜柱可承受的壓力上限為6,000 psi(400 bar40MPa),但為了盡可能延長(zhǎng)色譜柱和系統(tǒng)使用壽命,應(yīng)避免常規(guī)運(yùn)行壓力長(zhǎng)期超過(guò)4,000-5,000 psi。

 

F. 溫度

  為了改善選擇性、降低溶劑粘度和提高傳質(zhì)速率,操作Spherisorb色譜柱推薦的溫度范圍為20-45。但是,任何高于室溫的溫度都可能對(duì)色譜柱壽命產(chǎn)生不良影響,色譜柱壽命還會(huì)根據(jù)pH和緩沖液條件而有所不同。

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IV. 故障排除

  保留時(shí)間、分離度或柱壓變化通常是色譜柱污染所致。請(qǐng)參閱“色譜柱清洗、再生和存放"。色譜柱故障排除的信息可以在沃特世色譜柱及消耗品簡(jiǎn)要指南上查找。


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